武漢明皓生物科技股份有限公司

1. 氨基化及乙酰化

如果合成多肽為蛋白質(zhì)的內(nèi)部序列，通過N端乙酰化或C端氨基化可以去除多肽電荷使其更趨向于蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu)，同時(shí)增強(qiáng)了多肽對外肽酶的抵抗力。

2. 生物素及FITC標(biāo)記

FITC是熒光標(biāo)記的活性前體。為了有效的標(biāo)記N端，可在多肽的N端和熒光基團(tuán)之間插入七原子的胺己酸酯間隔結(jié)構(gòu)(NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH)；在C端進(jìn)行生物素標(biāo)記時(shí)，常在其末端加上一個(gè)賴氨酸殘基，生物素被連接到賴氨酸側(cè)鏈，同時(shí)賴氨酸的的正電荷也被去除。

3. 多種二硫鍵修飾

在半殘基間制作二硫鍵可以實(shí)現(xiàn)多肽環(huán)狀化，但由于二硫鍵是隨機(jī)形成的，因此對于含多個(gè)半殘基的多肽來說，這是個(gè)挑戰(zhàn)。金斯瑞可在半指定的位置構(gòu)建二硫鍵，能實(shí)現(xiàn)一條多肽內(nèi)導(dǎo)入三個(gè)二硫鍵修飾。

4. 多種磷酸化

多肽磷酸化可以幫助研究磷酸化對多肽和蛋白結(jié)構(gòu)的影響以及蛋白激酶的作用機(jī)理，金斯瑞已經(jīng)成功地為客戶合成了大量的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸等磷酸化多肽。對于含有多個(gè)羥基氨基酸的多肽，可以通過交叉檢測或Fmoc檢測來選擇、確定多肽的磷酸化。

5. KLH, BSA,OVA

多肽抗原由于太小而不能產(chǎn)生顯著的免疫反應(yīng)，因此需要將多肽抗原偶聯(lián)到BSA、OVA、KLH等較大的蛋白載體上。KLH由于在ELISA或Western blotting檢測中沒有抑制作用從而不影響檢測結(jié)果。常用的偶聯(lián)原理是順丁烯二酰亞胺理論，即將多肽中的半殘基與載體蛋白偶聯(lián)。因此合成抗原多肽時(shí)，在其N端或C端添加一個(gè)半殘基有利于多肽與載體蛋白的偶聯(lián)。

注：KLH是一種很大的凝聚蛋白(MW = 4*105 to 1*107)，由于它特殊的大小及結(jié)構(gòu)，它在水中的溶解度不高，常常需要采取一些方法解決，但這并不影響免疫原性，免疫時(shí)常使用混合溶解的方法。

6. 修飾

修飾是將非離子的、無毒的、生物體不排斥的及高親水性的聚合體，通過化學(xué)方法偶聯(lián)到大分子上（蛋白質(zhì)、多肽等等）。修飾的大分子由于溶解性（主要指疏水性藥物）及生物利用率的增高，寄主內(nèi)小免疫反應(yīng)的抗原偽裝，清除率降低循環(huán)時(shí)間延長，從而提高了治療能力。

7. 同位素標(biāo)記

為了進(jìn)行核磁共振實(shí)驗(yàn)，我們將多肽標(biāo)記穩(wěn)定的非放射性的同位素。標(biāo)記2H、15N、13C、或 15N 及 13C同時(shí)標(biāo)記的多肽合成后便于檢測。如果您需要標(biāo)記修飾，請?zhí)峁┠男蛄屑皹?biāo)記需求。

8. 復(fù)合抗原肽修飾

多抗原肽（Multiple-Antigen peptide, MAP）是生產(chǎn)高效價(jià)的抗多肽抗體和多肽疫苗的一種有效方法。多重抗原肽以賴氨酸的a-或e-基團(tuán)形成主鏈，以多拷貝的肽抗原作外表層的分枝狀合成多肽。根據(jù)賴氨酸的數(shù)目，可以合成不同數(shù)目側(cè)鏈的多抗原肽，這樣不必將抗原偶聯(lián)到載體蛋白質(zhì)便能產(chǎn)生高滴度、高親和力的抗體。

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